蛋白質含量檢測方法概述

蛋白含量檢測試劑盒(BCA法)

產品名稱

通用名：蛋白質含量檢測試劑盒(BCA法)

原理

在堿性環境下蛋白質分子中多肽鍵結構與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu+，BCA與Cu+特異性結合成穩定的紫色復合物，該復合物在562nm處有*的光吸收值，在一定范圍內，光吸收值與蛋白質濃度成正比，溶液顏色的深淺與蛋白質含量成正比，可根據光吸收值測定蛋白質濃度。

實驗試劑

試劑A     100ml   (4℃保存)

試劑B     30ml   (4℃保存)

4mg/ml BSA標準品    0.5ml   (-21℃保存)

儀器

酶標儀或分光光度計，工作波長540nm~590nm，*工作波長562nm,如無此波長，建議優先使用490nm波長。

適用范圍

不含還原劑的蛋白樣品。

實驗步驟

1. 工作液配制：將試劑A與試劑B按50:1的比例混合均勻。

2. 標準品稀釋：用純化水將2mg/ml的BSA標準品依次稀釋為以下濃度1600、800、400、200、100、50、25ug/ml。注意用純化水標記空白。

3. 參照下表上樣

充分混勻后，在37℃條件下孵育30分鐘或室溫下靜置2小時。

4. 在酶標儀或分光光度計上，以562nm波長下，空白管調0后測定各管OD值。

5. 以OD值為Y軸，標準品濃度為X軸繪制標準曲線。

6. 從標準曲線上查找待測樣品濃度，注意稀釋后的樣品所測濃度需乘以稀釋倍數。

說明

1. BCA法的檢測范圍是20-2000ug/ml，若樣本超過此范圍需再酌情稀釋。

2. 樣本中含有還原劑，EDTA或葡萄糖濃度大于10mM時不可直接使用BCA法，樣本經液體樣品蛋白抽取試劑沉淀后，可*去除干擾物質。

3. 在37℃孵育30分鐘或室溫下靜置2小時對檢測比較便利，但嚴格來講，此時反應尚未達到終點，通常每10分鐘A562下OD值升高約2.3%，在10分鐘內測定不會影響精度。

4. 可測量吸附于固相支持物如酶標版、瓊脂糖、親和層析凝膠上的蛋白。

5. 本法僅適用于科研。