禽白血病病毒抗原檢測試劑盒使用步驟

禽白血病病毒抗原檢測試劑盒

組份

1 預包被板條 1/2塊 7 陰性對照 2ml

2 酶結合物 11/22ml 8 陽性對照 2ml

3 25倍濃縮洗滌液 30/60ml 9 封板膜 2/4張

4 底物A液 8/16ml 10 說明書 1份

5 底物B液 8/16ml      

6 終止液 6/11ml      

本試劑盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的檢測。 本試劑盒是采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（DAS-ELISA）原理來檢測禽白血病病毒的P27抗原。檢測時，在相應的反應孔中加入陰、陽對照品和待測樣品，經溫育后，若樣品中含有P27抗原，則與酶標板上的抗體結合形成抗原抗體復合物，反之則不能結合。洗滌后，加入的酶標記物與包被板上的抗原抗體復合物發生特異性結合。再次洗滌后加入底物，酶催化底物反應呈現藍色，顏色深淺與樣品中P27抗原的含量成正相關，從而達到快速檢測的目的。

需自備的設備及試劑

酶標儀（650 nm）、去離子水、離心管、微量移液器、計時器、離心機（4000r/min）、棉簽、氯化鈉、  、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀等。

注意事項

  本品僅供體外檢測使用。

  不同批號試劑盒中的組份不可混用。

勿使用過期的試劑盒，已開封的組份應在有效期內       使用。

必須使用符合藥典規定的水（如蒸餾水、去離子水或純水）稀釋洗滌液。

試劑盒各組份在使用前應預先平衡至室溫（25±2℃）。

未使用的酶標板應放回鋁箔袋并封口，2-8℃保存。

應避免使用金屬類物質盛裝和攪拌試劑。

勿將底物溶液暴露于強光下。

本品終止液為強酸，避免同眼、皮膚接觸。

移液系統應保證準確清潔，應提供準確溶液體積的同時不造成交叉污染。

操作方法

一：試劑配制

a）0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液：準確稱取氯化鈉 8.0 g、   0.2 g、磷酸氫二鈉1.14 g和磷酸二氫鉀0.24 g，加入去離子水溶解并定容至1 L。

b）洗滌工作液：使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（20-25℃），并搖動，使沉淀溶解（*在37℃恒溫培養箱中加熱5-10 min），然后用蒸餾水作25 倍稀釋（例如：30 mL 的濃縮洗滌液加上 720 mL 蒸餾水）勻，稀釋好的洗滌液2-8℃可存放7日。

二：樣品處理

蛋清：取全蛋，破碎后，直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子：取棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣，然后放入1 mL PBS溶液（0.01mol/L，pH 值 7.4）中，-20℃以下冰箱中凍融一次，待其恢復至室溫后，取 100 μL 進行檢測。 疫苗：疫苗稀釋液將疫苗溶解，再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀釋10-20倍后，取100μL進行檢測。 胎糞：無需稀釋，可以直接用于檢測，若樣品中含有沉淀或雜質，需在2000-3000 r/min，離心 10 min，取 100 μL 上清進行檢測。

三：操作步驟

取酶標板（根據樣品多少，可拆開分次使用），陰性對照、陽性對照和待檢樣品各取100 μL加至相應微孔中，蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板10 s，充分混

勻，室溫下（25±2℃）避光反應60 min。

注：陰、陽性對照各設2孔，待檢樣品設1孔。

甩掉孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液300μL，震蕩洗滌4次，每次30s 左右，在干凈吸水紙上拍打去除殘存洗滌液。 每孔加入100μL酶標記物工作液，蓋好蓋板膜，室溫下（25±2℃）避光反應60 min。 棄去孔中的溶液，洗滌4次，方法同2。 底物A液與底物B液按1:1混合均勻，加入孔中，100 μL/孔，蓋上蓋板膜，室溫下（25±2℃）反應15 min。

注：底物工作液也可提前配制，但配制完后需5 min內使用。

每孔加入終止液100μL，5 min內測定結果。

注：若終止液出現絮狀結晶，可37℃加熱，待其溶解后使用。

結果判定

在酶標儀上讀各孔OD650nm值，計算出陰性對照孔OD均值NC和陽性對照孔OD均值PC。

注：NC值＜0.200且0.500＜PC值≤2.000，試驗結果才有效。否則，應進行重復試驗。

按照公式計算出S/P值：S/P=（SC-NC）/（PC-NC）。

注：SC為被檢樣品孔OD值。

如果S/P＜0.17，說明樣品中無禽白血病病毒P27蛋白；如果S/P≥0.17，說明樣品中有禽白血病病毒P27蛋白。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。

禽白血病是由禽C型反錄病毒群的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統稱，主要是淋巴細胞性白血病，其次是成紅細胞性白血病、成髓細胞性白血病。此外還可引起骨髓細胞瘤、結締組織瘤、上皮腫瘤、內皮腫瘤等。大多數腫瘤侵害造血系統，少數侵害其他組織